荧光pcr法和pcr荧光探针法,荧光pcr法

本篇文章给大家谈谈荧光pcr法，以及荧光pcr法和pcr荧光探针法对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。

本文目录一览：

• 1、荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同
• 2、荧光PCR技术如何操作？
• 3、pcr荧光探针法准确率高不

荧光PCR法与PCR荧光探针法有何不同

荧光定量PCR法检测的是SYBR Green掺入到双链DNA中的量。SYBR Green掺入到双链DNA中后会发出荧光。但是只要是双链，它都掺。

而探针法是当探针结合到目标序列上以后，聚合酶降解探针后，探针上自带的荧光基团离开淬灭基团，从而发出荧光。

从两者的原理上来看，不难判断，荧光PCR法更加简单方便，而且成本低。而探针法特异性更强。

扩展资料：

荧光定量PCR(Flurogenic Quantitative Polymerase ChainReaction，FQ-PCR；real-time quantitative PCR, RT-qPCR or qPCR)。

1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。

参考资料来源：荧光定量PCR_百度百科

荧光PCR技术如何操作？

影响荧光PCR的因素很多，但从操作和技术上来讲应该要注意一下几点：

1.

RNA的完整性

因为RNA一旦降解所定量的结果就不能正确反映样品中mRNA的量，所得的结果也是错误的。所以在RNA提取过程中要严格遵守操作规范，避免RNA酶的污染。

2.

RNA样品中的基因组DNA污染

提取的RNA样品中不可避免地混有少量的基因组DNA。基因组DNA对试验有两个影响：一是影响对RNA的精确定量；二是影响PCR扩增的特异性。

3.

PCR反应体系的优化

PCR扩增过程必须保证扩增产物只有特异的目标产物，为此，首先要保证PCR反应体系达到最优。目前许多公司都有用于实时定量PCR反应的试剂盒，可以方便PCR反应的操作。

4.

反转录

反转录所得cDNA的量必须精确地等于相应的mRNA的量，反转录对于实时定量PCR来说是非常关键的一步。目前常用的反转录酶有2种：AMV-RT和MMLV-R。反转录常用的引物有随机引物、Oligo-dT和特异引物。相比之下Oligo-dT和特异性引物更适合实时定量PCR。

5.利用实时定量PCR研究基因表达时，一般用相对定量的方法相对定量必须用到内标基因。可靠的内标基因应是在不同细胞类型、不同试验条件下都稳定表达的持家基因。常用的内标基因有β-tublin、actin、

GAPDH、18sRNA、efla和Cyclophilin等。尽管在大多数情况下这些持家基因的表达非常稳定，但是

最近有报道认为这些持家基因的表达在某些情况下会发生变化。也就是说并不是任何内标基因都适合

任何试验。在选择内标基因时，应仔细考虑各种因素，选择合适的内标基因或内标基因组合。

pcr荧光探针法准确率高不

荧光定量pcr法检测的是sybr

green掺入到双链dna中的量。sybr

green掺入到双链dna中后会发出荧光。但是只要是双链，它都掺。

而探针法是当探针结合到目标序列上以后，聚合酶降解探针后，探针上自带的荧光基团离开淬灭基团，从而发出荧光。

从两者的原理上来看，不难判断，荧光pcr法更加简单方便，而且成本低。而探针法特异性更强。所选序列应该高度特异。应该选择具有最小二级结构的扩增子。这是很重要的，因为二级结构会影响反应效率。在任何实时应用中期望获得100%的扩增反应效率，这意味着每次循环中，体系内的扩增子都有两倍的增加。如果二级结构在热力学上比寡聚目的基因更稳定，那目的基因的杂交将会失败。二级结构还会阻碍酶的扩增。如果扩增子的二级结构不能避免，则引物的退火温度要相应提高。在整个过程中，我们要进行blast和类似的分析，以确保特异性。

关于荧光pcr法和荧光pcr法和pcr荧光探针法的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。